GM501 OvarStore

Zusammensetzung:

• GM501 OvarStore Transport: Hypo Thermosol
• GM501 OvarStore Dissection: Leibowitz L-15, HSA, Gentamycin
• GM501 OvarStore Cryo: Ethylenglykol, DMSO, DSS, Gentamycin
• GM501 OvarStore Thaw: Sucrose, HSA, Gentamycin
• GM501 Cult: NaCl, KCl, KH2PO4, MgSO4.7H2O, NaHCO3, CaCl2.2H2O, Dextrose-Anhydrat, Na-Lactat (50% solution), Na-Pyruvat, EDTA, Na-Alanyl-Glutamin, H2O, nicht-essentielle und essentielle Aminosäuren, 1% HSA, Gentamycin

Sicherheitshinweise und Vorsichtsmaßnahmen:

• Beim Umgang mit dem Produkt immer Schutzkleidung tragen.
• Stets unter strengen hygienischen Bedingungen (ISO 5 Bedingungen) arbeiten, um mögliche Verunreinigungen zu vermeiden.
• Die Medien darf nicht verwendet werden, wenn bei Wareneingang der Verschluss geöffnet und/oder die Flasche defekt ist.
• Die Medien dürfen nicht eingesetzt werden, wenn sie trüb und/oder sichtbar verfärbt sind und/oder Anzeichen einer mikrobiellen Kontamination zeigen.
• Nur für den vorgesehenen Gebrauch anwenden.
• GM501 OvarStore Dissection, Cryo, Thaw und Cult enthalten humanes Serumalbumin. Es wird hergestellt aus Blut von Spendern zertifizierter Blutbanken gemäß internationaler Richtlinien. Die Ausgangsstoffe sind negativ getestet worden auf Antikörper gegen HIV, HBC, HCV und HTLV I/ II und nicht reaktiv auf HBSAG, HCV-RNA und HIV-1 RNA und Syphilis. Keine bekannte Testmethode kann mit Sicherheit ausschließen, dass Produkte aus menschlichem Blut infektiöse Erreger übertragen. Aus diesem Grund sollten alle Proben als potentiell infektiös angesehen werden.

Gebrauchsanweisung:

Im Allgemeinen:

Die Entfernung zwischen dem OP und dem biologischen Labor entscheidet zwischen der Anwendung von GM501 OvarStore Transport Medium und GM501 OvarStore Dissection Medium.

Option A:

Wenn die Transportzeit zwischen 25 Minuten und maximal 26 Stunden liegt, wird empfohlen das Transport Medium (GM501 OvarStore Transport) zu verwenden. Die ideale Transporttemperatur für GM501 OvarStore Transport liegt zwischen 2°C und 8°C.

Option B:

Wenn die Transportzeit unter 25 Minuten liegt, wird empfohlen, das Dissection Medium (GM501 OvarStore Dissection) zu verwenden. Die ideale Transporttemperatur für GM501 OvarStore Dissection liegt zwischen Raumtemperatur und 37°C.

Vorbereitung der Extraktion von ovariellem Gewebe:

• Die laparoskopische Extraktion ist in jeder Phase des Zyklus möglich. Der behandelnde Arzt entscheidet, wann die Behandlung durchgeführt wird. 

1 Tag vor der Extraktion des ovariellen Gewebes

• Transportzeit nach Option A (siehe: „Im Allgemeinen“) - Bereitstellung von 25 ml - 50 ml GM501 OvarStore Transport in einem Kühlschrank bei 2°C bis 8°C.
• Transportzeit nach Option B (siehe: „Im Allgemeinen“) - Bereitstellung von 25 ml - 50 ml GM501 OvarStore Dissection in einem Kühlschrank bei 2°C bis 8°C. 

Tag der Extraktion des ovariellen Gewebes

• Bei Anwendung der „Option B“, Entnahme des GM501 OvarStore Dissection aus dem Kühlschrank und Erwärmung auf Raumtemperatur (maximal 37°C).
• Bereitstellen von drei sterilen Petrischalen (100mm), einem sterilen Skalpell, einem sterilen Urinprobenbehälter, zwei sterilen Pinzetten und sterilen Handschuhen unter einer sterilen LAF-Bank. Öffnen der Kryoröhrchen gemäß den Angaben des Herstellers und Kennzeichnen mit den Patientenangaben unter einer LAF-Bank.

Extraktion des ovariellen Gewebes:

• Die Extraktion von ovariellem Gewebe muss durch einen qualifizierten Spezialisten vorgenommen werden.
• Einbringen des extrahierten Gewebes in das vorbereitete 50ml-Röhrchen mit dem entsprechenden Medium („Option A“: 25ml - 50ml GM501 OvarStore Transport Medium; „Option B“: 25 ml - 50ml GM501 OvarStore Dissection Medium).

Transport des Gewebes zum biologischen Labor.

Vorbereitung der Kryoröhrchen und Einfrieren:

• Trennung des Eierstock-Medulla aus dem kortikalen Teil des Eierstockgewebes mit Skalpell und Pinzette.
• Vorbereiten der Gewebestreifen (ein Streifen pro Röhrchen).
• Behandlung der Gewebestreifen mit 30 ml GM501 OvarStore Cryo Medium über 30 Minuten bis maximal 1 Stunde bei Raumtemperatur im sterilen Urinprobenbehälter.
  
• Befüllen der vorbereiteten Kryoröhrchen mit GM501 OvarStore Cryo Medium, unter Verwendung einer sterilen Spritze und einer langen Kanüle.
• Nach der Äquilibrierung. Übertragen der Gewebestreifen in die Kryoröhrchen mit sterilen Pinzetten. Verschließen der Röhrchen und Einlegen der Röhrchen für 10 Minuten in Eiswasser.
• Positionieren der Kryoröhrchen im Rack des Einfriergerätes und wie folgt Kryokonservieren:

Stufe 1: Von Raumtemperatur auf 0°C, mit einer Rate von -2°C/min.

Stufe 2: Von 0°C bis -7°C, mit einer Rate von -1°C/min.

Seeding (manuell oder automatisch): Bei -7°C 10 Minuten Temperatur halten.

Stufe 3: Von -7°C bis -35°C, mit einer Rate von -0,3°C/min.

Stufe 4: Nach dem Erreichen von -35°C, Eintauchen des beladenen Kryoröhrchens in flüssigen Stickstoff für die langfristige Lagerung in einer Kryobank.

Auftauen:

Das Auftauen kann wahlweise nach einer der folgenden Methoden realisiert werden:

1. Methode 1: Kryo-Staws für 10s bei Raumtemperatur stehenlassen und danach in ein kochendes Wasserbad (100°C) für 20s eintauchen. Methode 2: 1,8ml Kryo-Vials für 30s bei Raumtemperatur stehenlassen und danach in ein kochendes Wasserbad (100°C) für 60s eintauchen. Der Auftauvorgang muss schnell erfolgen, daher empfehlen wir, die Temperatur des Wassers unbedingt bei 100°C und durch einen Magnetrührer in Bewegung zu halten. 
2. Das Auftauen des Gewebes im Wasserbad wird visuell auf das Vorhandensein von Eis kontrolliert: sobald das vorhandene Eis nur noch ca. 1mm dick ist,  wird der Gewebeträger aus dem Wasserbad entfernt. Die endgültige Temperatur der Einfrierlösung liegt nach dem Entfernen des Kryo-Trägers zwischen 4°C und 10°C.
3. Nach dem Auftauen werden die Ovarialgewebestücke innerhalb von 5–7Sekunden in einen 100ml Probecontainer mit 10ml–12 ml OvarStore Thaw™ übertragen. Der Probecontainer wird auf einem Magnetrührer ständig in Bewegung gehalten (200 U/min für 15min bei Raumtemperatur).
4. Die Rehydrierung der Ovarialgewebestücke erfolgt durch kontinuierliches Einpipettieren von 50ml OvarStore Transport™ Medium in einer Zeit von 30min bei Raumtemperatur. Hierbei empfiehlt sich ein Perfusionsgerät oder die kontinuierliche Abgabe mit Hilfe einer Infusionsvorrichtung. Die endgültige Saccharosekonzentration sollte ca. 0,08M – 0,09M betragen, somit einer isotonischen Lösung entsprechen.
5. Anschließend werden die Ovarialgewebestücke drei mal in OvarStore-Transport^TM je 10min lang gewaschen.
6. Nach Erwärmung werden die Ovarialgewebestücke in GM501 Cult für die nachfolgende in-vitro-Kultur überführt oder in Transportmedium OvarStore Transport^TM für die nachfolgende Transplantation zur Verfügung gestellt.